Puesta a punto de una prueba serológica para estudios de seroprevalencia de babesiosis bovina utilizando proteínas recombinantes de Babesia bigemina como antígenos

Abstract

RESUMEN

El presente trabajo fue realizado en el laboratorio de Babesiosis del Centro Nacional de Investigaciones Disciplinarias en Salud Animal e Inocuidad del Instituto Nacional de Investigaciones Agrícolas y Pecuarias (CENID-SAI INIFAP), el objetivo fue poner a punto el Ensayo por Inmunoadsorción Ligado a Enzimas Indirecto (iELISA) para estudios serológicos de babesiosis bovina con el uso de proteína recombinante RAP-1 como antígenos para Babesia bigemina, mediante la inoculación de esta proteína en dos ovinos, con el fin de observar reconocimiento de la proteína a nivel inmunológico (formación de inmunocomplejos), ya que la enfermedad es específica de bovinos. Se realizaron seis inoculaciones para un ovino y siete para el otro, con espacio de 14 días entre inoculaciones a una concentración total de 1900μl/ml junto con adyuvante de Freund vía intramuscular, se extrajeron muestras sanguíneas de cada día que se administró la proteína y se centrifugaron en el Laboratorio de babesiosis del CENID-SAI del INIFAP para obtención de suero sanguíneo y la posterior realización de pruebas serológicas; las cuales fueron Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) para la observación microscópica por epifluorescencia de la reacción antígeno nativo–anticuerpo reconocidos en las muestras (considerada como “la prueba de oro” en babesiosis bovina) y el Ensayo por Inmunoadsorción Ligado a Enzimas indirecto (iELISA), para poder identificar reconocimiento antígeno recombinante–anticuerpo. Los resultados obtenidos para la técnica de IFI demostraron positivas las muestras a partir del segundo muestreo para un ovino y partir del tercer muestreo. En la prueba de iELISA resultaron positivos a partir del segundo muestreo para ambos ovinos. De esta forma se demostró que existe reconocimiento inmunológico en ambas técnicas y que los productos derivados de las inoculaciones de la proteína recombinante RAP-1 de Babesia bigemina a ovinos fueron anticuerpos policlonales adquiridos exitosamente.

Por otro lado, se determinó la concordancia entre ambas pruebas serológicas para medir el grado de acuerdo entre ellas (precisión) obteniendo una concordancia sustancial. Posteriormente se realizaron pruebas serológicas de un hato proveniente de una zona endémica para comprobar que el antígeno recombinante puede reconocer para el antígeno completo de B. bigemina de campo. Del mismo modo se realizó la prueba de Inmunofluorescencia indirecta para confirmar el reconocimiento de anticuerpos y determinar que efectivamente el ganado estuvo en contacto con los antígenos, posteriormente se realizó Ensayo por Inmunoadsorción Ligado a Enzimas, para determinar que el antígeno recombinante RAP-1 de Babesia bigemina es capaz de reconocer al antígeno completo de Babesia bigemina. Los resultados demostraron que el antígeno recombinante RAP-1 reconoce al anticuerpo completo de Babesia bigemina, siendo de utilidad para estudios epidemiológicos de babesiosis bovina. Palabras clave: Babesia bigemina, RAP-1, reconocimiento, IFI, ELISA.