Obtención y caracterización de las proteínas recombinantes PLD y CP40, factores de virulencia de Corynebacterium pseudotuberculosis ovis con potencial inmunogénico

Abstract

La Linfadenitis caseosa es una enfermedad causada por Corynebacterium pseudotuberculosis biovar ovis, bacteria intracelular que provoca la formación de abscesos cutáneos y/o viscerales, y ocasiona importantes pérdidas económica en la producción de pequeños rumiantes. Existen vacunas comerciales; sin embargo, la protección conferida no ha sido eficaz para el control de la enfermedad. Actualmente el empleo de la tecnología del ADN recombinante ha permitido obtener proteínas con potencialidades inmunogénicas que podrían ser una alternativa para el desarrollo de nuevas vacunas, debido a esto el objetivo del presente trabajo fue obtener y caracterizar las proteínas recombinantes PLD y CP40 de C. pseudotuberculosis de un aislado mexicano (2J-L), antígenos con potencial inmunogénico. Los genes pld y cp40 se amplificaron mediante PCR, se clonaron en el plásmido pGEM-T Easy y se secuenciaron, para el análisis bioinformático. Las proteínas PLDr 2J-L y CP40r 2J-L se expresaron en cepas de E. coli BL21 (DE3) transformadas con los plásmidos pET28a-pld y pET28a-cp40. El análisis filogenético en base a la secuencia de los genes pld y cp40 permitió agrupar el aislado 2J-L junto a cepas del biovar ovis, presentando una mayor relación con la cepa de origen mexicano MEX29. La proteína PLDr 2J-L presentó un 100% de identidad con respecto a la secuencia de las proteínas de las cepas de origen mexicano incluidas en el estudio. La proteína CP40r 2J-L presentó un 100% de identidad con respecto a MEX1, MEX2, MEX9 y MEX29, mientras que un 99% con respecto a CP40 de MEX25 debido a una variación de (V/L) en la posición 247. La caracterización de ambas proteínas se realizó in silico con la determinación de las propiedades físico-químicas, composición y predicción de las estructuras secundarias y modelado en 3D. El potencial inmunogénico de las proteínas se determinó mediante la predicción de epítopos lineales y discontinuos de células B y epítopos de células T presentados en el contexto del MHC I. Por primera vez se presenta un mapeo in silico de epítopos de células B y T para PLD y CP40 a partir de un aislado mexicano. Todos los epítopos identificados fueron conservados en un 100%, por las proteínas PLD y CP40 de las cepas de origen mexicano MEX1, MEX2, MEX9, MEX25 y MEX29. El programa Vaxign identificó ambas proteínas como antigénicas con función de adhesión y VaxiJen clasificó ambas proteínas como antígenos inmunogénicos probables para un valor de corte de 0.4. Las proteínas PLD y CP40 de C. pseudotuberculosis aislado mexicano 2J-L, obtenidas por vía recombinante, constituyen una fuente de antígenos potencialmente inmunogénicos para el desarrollo de una vacuna o medios diagnósticos.