Evaluación de un tratamiento alternativo para modificar el microbioma causado por los factores predisponentes asociados a la prevalencia de Malassezia spp. en perros con otitis externa diagnosticados mediante PCR y citología

Abstract

La otitis es una enfermedad inflamatoria del canal auditivo externo, causada por diversos factores físicos y ambientales que favorecen la proliferación de bacterias y levaduras como Malassezia spp. existen diversos tratamientos para este padecimiento, sin embargo, la mayoría de los tratamientos pueden generar resistencia antimicrobiana y antimicótica, por lo tanto, el objetivo del trabajo fue evaluar la efectividad de un tratamiento alternativo a fin de modificar el microbioma en perros diagnosticados con otitis externa por Malassezia spp. para eliminar los signos clínicos asociados a los factores predisponentes. Un total de 30 perros de razas y géneros indistintos, de 2 a 9 años, fueron diagnosticados por medio de microscopia y PCR convencional con otitis externa por Malassezia spp, durante la primera consulta se obtuvieron 4 hisopados óticos de los canales auditivos afectados, los primeros dos hisopados, uno del oído izquierdo y otro del oído derecho, fueron utilizados para la realización de citología por tinción Diff quick para visualización de levaduras y células presentes, los segundos dos hisopados se utilizaron para realizar una reacción de PCR utilizando los cebadores NL1 Y NL2 del fragmento D1/D2 del gen 26S, que amplifica un fragmento de 600pb, durante la consulta se realizó un cuestionario dermatológico para obtener la información necesaria referente a los factores asociados a la prevalencia de otitis externa por Malassezia spp., para el análisis de datos utilizó la Prueba de Chi-cuadrada P= 0.05 y un Análisis de componentes principales P= 0.05. Los productos de PCR amplificados, se purificaron a partir del gel de agarosa, utilizando el Wizard® SV Gel y PCR Clean -Up System (Promega, EE.UU.). 30 ng del producto de PCR purificado se sometió al análisis de secuenciación utilizando Dye® Terminator v.3.1 Ciclo de Secuenciación Kit (Applied Biosystems, EE.UU.). Las secuencias se procesaron en un analizador de secuencia 3100 (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU). Las secuencias obtenidas fueron alineadas con secuencias reportadas en el GenBank utilizando ClustalW Software para verificar la especie de Malassezia obtenida. Después se realizó un análisis filogenético utilizando el sofware Mega X.