AISLAMIENTO DE UNA MUTANTE DELETADA DEL GEN cobB1 DE Streptomyces coelicolor M-145

Abstract

Las bacterias deben adaptarse a su entorno por medio de la regulación de sus procesos metabólicos a diferentes niveles, desde la regulación de la transcripción, hasta la modificación de una proteína después de que es sintetizada. Las modificaciones post-traduccionales son un mecanismo de regulación ampliamente distribuido en bacterias y son de importancia porque le dan diversidad al proteoma a la vez que funcionan como una forma de control rápido de diferentes funciones celulares. Las diversas modificaciones post-traduccionales que existen pueden alterar la estructura y función de las proteínas, la formación de complejos proteicos y la actividad enzimática. La acetilación de lisinas es una modificación reversible muy recurrente en bacterias y se ha visto involucrada en procesos metabólicos, con énfasis en el metabolismo del carbono. Se han descrito mecanismos generales de acetilación enzimática y acetilación no enzimática, así como la reversión de esta modificación por enzimas con actividad desacetilasa, como lo son las sirtuinas dependientes de NAD+. En Streptomyces coelicolor, organismo modelo del género Streptomyces, se ha identificado que la sirtuina CobB1 tiene actividad desacetilasa y similitud con CobB de E. coli. El metabolismo secundario de S. coelicolor ha sido estudiado debido a su capacidad de producir metabolitos especializados de interés biotecnológico, sin embargo, aún no se conoce a profundidad cómo se regula el metabolismo primario que genera precursores para la biosíntesis de antibióticos y otros metabolitos. Por ello ha surgido el interés por investigar qué impacto tiene la acetilación en la regulación del metabolismo de esta bacteria. Para contribuir al estudio del acetiloma de S. coelicolor, en este trabajo se aisló una cepa mutante deletada del gen cobB1 con el fin de evitar la desacetilación de sus proteínas blanco, para en un futuro obtener el patrón de acetilación de las proteínas en este microorganismo. Esto se realizó clonando el gen en un plásmido junto con regiones adyacentes y se sustituyó por un cassette de resistencia a apramicina con extensiones homólogas a las regiones flanqueantes del gen mediante recombinación homóloga con el sistema λ Red. Posteriormente fue introducido a S. coelicolor por conjugación intergenérica con E. coli. Finalmente se aislaron colonias resistentes a apramicina que recombinaron con el plásmido sustituido con el cassette.