Dinámica del Cromóforo de la GFP Recombinante bajo la influencia de un gradiente térmico

Abstract

En esta tesis estudiamos los cambios que produce la variación de la temperatura en una de las proteínas que revolucionó el estudio biológico y científico “la proteína verde fluorescente o GFP (por sus siglas en inglés)”, realizando un estudio teórico experimental y computacional para caracterizar dinámica y estructuralmente a la proteína; adjuntamente con una técnica experimental se obtuvo la GFP siguiendo un protocolo de especificaciones estandarizadas. El trabajo se complementó realizando un estudio de espectrometría de emisión que nos permitió ver el efecto sobre la intensidad de fluorescencia que ocurre en el interior de la proteína verde fluorescente al variar el rango de temperatura, obteniendo un patrón de la intensidad de fluorescencia en función de la temperatura. Se reconoce clásicamente que a mayor temperatura se adquiere una mayor vibración de los átomos de esta manera las vibraciones del cromóforo en el centro de la proteína aumentarán. Dado que dicho cromóforo es el responsable de la intensidad de fluorescencia, se propuso como hipótesis: “A mayor temperatura mayor intensidad de fluorescencia”. Se realizó un estudio de las vibraciones aleatorias del cromóforo de la proteína GFP en medio líquido a distintas temperaturas, utilizando dinámica molecular clásica. Termodinámicamente hablando se sabe que a mayor energía cinética mayor es la vibración de los átomos, esto afectará directamente al cromóforo por lo que se percibe en el espectro. Para el seguimiento de estos cambios se integró un set experimental que simultáneamente fuese sensible a inducir cambios de temperatura modulables y detectar con una interfaz la espectrometría de emisión de alta resolución. Obteniendo así los principios de un termómetro biológico intracelular.