Actividad in vitro del extracto de Limón (Citrus aurantifolia) sobre los fenotipos ORSA/MRSA de Staphylococcus aureus, aislados de hatos lecheros de producci´on familiar

Abstract

Un sistema de producción lechero predominante en México es el de tipo familiar, que aportan cerca del 30 % de la leche nacional. Dentro de los sistemas de producción lechera tienen problemas zoosanitarios que afectan el rendimiento y calidad láctea. Tal es el caso de la mastitis, la cual es una enfermedad infecciosa que sufre el ganado lechero y, por tanto, tiene un gran impacto en la salud pública. El agente causal primordial de dicha enfermedad el Staphylococcus aureus, el cual debido a diversos factores ha adquirido notable resistencia los antimicrobianos, por lo que es necesario buscar alternativas de tratamiento y control. or ello, en este trabajo se evaluó el efecto antimicrobiano in vitro de los extractos crudos obtenidos de la cascara y hoja del limón Citrus aurantifolia contra cepas de Staphylococcus aureus aislados de vacas con mastitis subclínica en un hato lechero familiar. Para ello realizó un muestreo a una unidad de producción lechera de tipo familiar en el Valle de Toluca, Estado de México. En total se obtuvieron 140 muestras de leche a partir de uestras individuales obtenidas de cada cuarto glandular de un total de 35 vacas en l´ınea de ordenó, de las cuales se logró aislar e identificar 30 cepas de Staphylococcus aureus (S. aureus). A cada una de las cepas identificadas se les realizó una prueba de sensibilidad in vitro antimicrobiana contra Oxacilina (1µg), Penicilina (10UI), Amoxicilina/Ac. Clavulánico (20/10µg), Cefoxitina (30µg) y Vancomicina (30 µg) mediante el método de difusión en discos, los resultados fueron comparados con cepas control de S. aureus ATCC 29213 (sensible), TCC 25923 y ATCC 43300 (resistente). Con base en las pruebas realizadas, se obtuvieron los aislamientos de Staphylococcus aureus sensibles a Oxacilina (OSSA) y los resistentes a Oxacilina (ORSA), los cuales para su confirmación se incubaron simultáneamente a 35 y 42 C durante 24 horas. La determinación del fenotipo MRSA fue basada en el M´etodo de Tamizado en Placa (Oxacillin Screen Plate) en agar M¨uller-Hinton, utilizando diferentes concentraciones de Oxacilina: 2, 4 y 6 µg/mL. Para la elaboraci´on de los extractos crudos de limón, se realizó recolección de material vegetal (tanto hojas como cascaras) de Citrus aurantifolia en Zitácuaro, Michoacán, durante Febrero a Marzo de 2016. Dos tipos de extractos crudos fueron elaborados: alcohólico y acuoso (haciendo uso de hoja y cascara del limón, respectivamente). Una vez obtenidos dichos extractos, se realizó la prueba de sensibilidad in vitro frente a las cepas de Staphylococcus aureus aisladas, utilizando concentraciones de 10-50 µL. Como ◦ resultado, se obtuvo una baja frecuencia de infección por S. aureus (21.4 %) en el hato lechero muestreado en el Valle de Toluca. Al evaluar la resistencia in vitro de S. aureus a los antibióticos β-lact´amicos, se observó una amplia proporción para la Penicilina (93.3 %), así como una amplia proporción de sensibilidad para Amoxicilina/Ac. Clavulánico (70 %), Oxacilina (80 %), Cefoxitina (70 %) y Vancomicina (60 %). Los antibiotipos ORSA/MRSA mostraron sensibilidad a mayor dilución de los extractos, obteniéndose un rango de 6 a 8 mm en la dilución de 10µL y un rango de 13 a 20 mm para la dilución de 50µL en el extracto alcohólico de hoja; mientras que para el extracto acuoso de hoja se observaron medidas de 0mm en la dilución de 10µL y un rango de 10 a 13 mm en la dilución de 50µL. Así mismo, para los extractos de cascara, se obtuvo ausencia de inhibición en la concentración de 10µL tanto para el extracto alcohólico como para el acuoso y un rango de 9 a 12 mm para los aislamientos evaluados en la concentración de 50µL para los extractos alcohólicos y un rango de 11 a 14 mm a las concentraciones de 50µL en el extracto acuoso. La confirmación de la presencia de los antibiotipos ORSA Y ORSA/MRSA representa un riesgo permanente de infección en los hatos lecheros y su potencial riesgo a la salud pública. De los resultados obtenidos en esta investigación, se puede concluir que los extractos demostraron buenos niveles de actividad antimicrobiana contra las cepas de Staphylococcus aureus aisladas de vacas lecheras con mastitis subclínica en un hato lechero.