CARACTERIZACIÓN PATOLÓGICA DE UNA ENFERMEDAD HEMORRÁGICA EN CARPA COMÚN (Cyprinus carpio carpio) E IDENTIFICACIÓN DEL AGENTE ETIOLÓGICO

Abstract

En octubre de 2015 ingresó al Centro de Investigación y Estudios Avanzados en Salud Animal (CIESA), una muestra compuesta por 15 peces de aproximadamente 250 grs de carpa común (Ciprinus carpio carpio), provenientes de la laguna de Tecocomulco, en el estado de Hidalgo. El motivo era un estudio de rutina, sin reporte previo de enfermedad ni mortalidad de alguna de las especies que habitan el cuerpo de agua, por parte de las instancias remitentes. Durante la necropsia de los animales, se tomaron preparaciones húmedas de la piel, aletas y branquias para diagnosticar la presencia de parásitos, descartando hallazgos que fuesen letales para los peces, además se encontraron en poca cantidad. Al estudio sobre signos clínicos sobresalientes, destacó la presencia de áreas de necrosis superficial de piel con pérdida de escamas, exoftalmia, branquias pálidas, distención abdominal, hemorragias diversas en aletas, mandíbula y diversas zonas del cuerpo. También, se detalló el aspecto, coloración y el contenido de los órganos internos, donde se observó ascitis sero-hemorrágica, formación severa de adherencias pleurales entre los órganos abdominales, además de esplenomegalia. Se continuó con la recolección de fragmentos de tejido de algunos órganos como bazo, hígado y riñón para el aislamiento de agentes bacterianos en medios convencionales, pero las improntas realizadas no evidenciaron presencia de bacterias. Para aislamiento viral, aproximadamente un ml de fragmentos de bazo y riñón de los peces con hemorragias y adherencias fueron depositados en tubos Falcón de 15 ml conteniendo 9 ml de medio L-15 (Medium LEIBOVITZ´S Cat 11415-064, GIBCO BRL), las muestras fueron maceradas, centrifugadas y filtradas en membrana de 0.22 micras (μm) para inoculación posterior en una monocapa de células EPC (Epitelioma papuloso de la carpa), con ≥ 90% de confluencia e incubados a 20°C. Las muestras con efecto citopático positivo (CPE), sugestivo de infección viral fueron confirmadas mediante RT-PCR específico para virus de la viremia primaveral de la carpa. Ya que por los signos clínicos que presentaron los peces y los hallazgos nulos realizados frente a parásitos y bacterias, se trataba de una enfermedad no antes diagnosticada dentro del país. Y posteriormente confirmadas empleando los cebadores y recomendaciones que se mencionan en el manual de la OIE, esperando una amplificación de 714 pb. El producto de amplificación se analizó mediante electroforesis en gel de agarosa al 1,5% y fue sometido a una prueba semi-anidada diseñada para amplificar un producto de de 606 pb. Ambos productos obtenidos fueron purificados mediante el kit Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up System (Promega, USA). Posteriormente fueron mandadas a Macrogen Korea (Seoul, Rep. of Korea), para su secuenciación. Las secuencias obtenidas se ingresaron a Blast NCBI y se obtuvo una similitud de 96-97%, respecto al gen de la proteína G del virus de la viremia primaveral de la carpa (SVCV). Para el análisis e identificación del agente etiológico por comparación con otras secuencias depositadas en el GenBank, se usó un fragmento de 426 pb de la muestra Carp-1. Generando un cladograma. La placa de cultivo celular que mostro CPE después de ser inoculada con el virus aislado, fue muestra para buscar el agente infeccioso a través de microscopia electrónica. Confirmando la presencia viriones con típica forma de bala que distingue a la Familia Rabdoviridae. Las lesiones halladas en distintos órganos internos, se describieron histológicamente para su comparación con las reportadas en estudios de la enfermedad de SVCV por diversos autores.