Resumen:
En el presente trabajo se generó la mutación Ile126Phe y se investigó el efecto que tenía sobre la actividad alcohólica de la-amilasa de Thermotoga maritima (AmyA-F). Este cambio fue propuesto a través de un algoritmo creado por el alumno de doctorado Rodrigo Alejandro Arreola Barroso, donde a partir de la comparación de mapas de contacto dentro de un grupo de enzimas transglicosídicas contra un grupo de enzimas puramente hidrolíticas, se pretende identificar, en base a frecuencias, los aminoácidos clave que otorgan sus características a cada grupo de enzimas.
Este mismo cambio también fue introducido en una mutante de la amilasa previamente construida dentro del laboratorio en donde se cambió la histidina en la posición 222 por una glutamina (AmyA-Q) y que ya presenta un incremento del 20% en la actividad de alcohólisis con respecto a la amilasa silvestre.
Se evaluaron los efectos producidos por la mutación al comparar las enzimas con las AmyA- Wt y AmyA-Q en pruebas de hidrólisis y alcohólisis, determinando al mismo tiempo parámetros cinéticos como kcat y Km que nos ayudaran a comprender mejor el alcance del cambio introducido.
Descripción:
Las proteínas son las moléculas más complejas que hay, llevando a cabo las funciones necesarias para que cualquier proceso biológico pueda existir. La evolución las ha transformado y refinado para que realicen una función específica cumpliendo con los altos criterios de velocidades y especificidades demandadas por los organismos vivos. Estas características de las proteínas son debido a la participación de muchos factores entre los cuales se encuentran la conformación cuaternaria de la proteína, la carga de aminoácidos que ésta posea, la interacción entre aminoácidos dentro de ésta, así como la interacción de éstos con el medio en donde se encuentre la proteína y las propiedades fisicoquímicas que sus cadenas laterales le otorguen como potencial eléctrico, solubilidad, estabilidad etc.