INCREMENTO EN LA ACTIVIDAD ALCOHOLITICA DE AmyA DE Thermotoga maritima MEDIANTE MUTAGÉNESIS

Abstract

En el presente trabajo se generó la mutación Ile126Phe y se investigó el efecto que tenía sobre la actividad alcohólica de la-amilasa de Thermotoga maritima (AmyA-F). Este cambio fue propuesto a través de un algoritmo creado por el alumno de doctorado Rodrigo Alejandro Arreola Barroso, donde a partir de la comparación de mapas de contacto dentro de un grupo de enzimas transglicosídicas contra un grupo de enzimas puramente hidrolíticas, se pretende identificar, en base a frecuencias, los aminoácidos clave que otorgan sus características a cada grupo de enzimas.

Este mismo cambio también fue introducido en una mutante de la amilasa previamente construida dentro del laboratorio en donde se cambió la histidina en la posición 222 por una glutamina (AmyA-Q) y que ya presenta un incremento del 20% en la actividad de alcohólisis con respecto a la amilasa silvestre.

Se evaluaron los efectos producidos por la mutación al comparar las enzimas con las AmyA- Wt y AmyA-Q en pruebas de hidrólisis y alcohólisis, determinando al mismo tiempo parámetros cinéticos como kcat y Km que nos ayudaran a comprender mejor el alcance del cambio introducido.