EVALUACIÓN DE TRES METODOS DE EXTRACCIÓN DE ADN EN TÉPALOS DE Tigridia pavonia (L.f.) DC.

Abstract

La extracción de DNA libre de polisacáridos, polifenoles y proteínas en plantas es uno de los pasos esenciales para diversos estudios en Biología Molecular, que requieren de métodos eficientes que permitan el aislamiento de ADN con buena pureza e integridad. El objetivo de este estudio fue comparar tres métodos para la extracción y purificación de ADN en tépalos de Tigridia pavonia. Los métodos evaluados fueron: el método de Zhou et al. (1999), Barba-González (2005), bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB) y Trizol (SIGMAMT) . Para este estudio se utilizaron tépalos de T. pavonia previamente diferenciados de la siguiente forma; (TIB) tépalo interno basal, (TID) tépalo interno distal, (TEB) tépalo externo basal y (TED) tépalo externo distal. Las variables evaluadas fueron, cantidad de ADN obtenido, relación de absorbancias A260/280 y A260/30, e integridad de ADN en electroforesis en gel de agarosa. Los resultados mostraron que con bajas temperaturas el rendimiento del ADN se ve favorecido, aumentando la concentración y mejorando la relación de absorbancias, mientras que el tejido almacenado por tiempo prolongado provoca una degradación de la molécula. El mejor método para la extracción de ADN en tépalos de T. pavonia fue el Trizol (SIGMA TM), con el cual se obtuvieron concentraciones de DNA de hasta 3355.4 ng μL-1 a partir de tejido almacenado a -20°C y de 1196.6 ng μL- 1, con tejido almacenado a -80°C. Se cree que la hora de colecta está relacionado con el rendimiento y calidad del ADN, así como por el almacenamiento prolongado favorece la degradación de la molécula.